какие клетки окрашиваются что такое витальный краситель

ВИТА́ЛЬНОЕ ОКРА́ШИВАНИЕ

Том 5. Москва, 2006, стр. 390
Скопировать библиографическую ссылку:

ВИТА́ЛЬНОЕ ОКРА́ШИВАНИЕ (прижизненное окрашивание), метод окрашивания живых клеток спец. красителями, применяемыми в нетоксич. концентрациях. Такими красителями могут быть осно́вные (напр., метиленовый синий) и кислотные (напр., феноловый красный). Проникая в клетки животных, одни красители диффузно окрашивают цитоплазму, другие красители откладываются в виде гранул в области комплекса Гольджи, оставляя ядро и цитоплазму неокрашенными. При повреждении клеток окрашивание диффузными красителями усиливается, гранулярные же теряют способность образовывать гранулы и окрашивают цитоплазму и ядро диффузно. В живых клетках растений красители концентрируются в вакуолях, в мёртвых – прокрашивают весь протопласт. Эти особенности дают возможность отличать мёртвые и повреждённые клетки от живых. Количественный учёт связанного клетками красителя позволяет судить о более тонких сдвигах в их функциональном состоянии. Кислотные гранулярные красители применяются для выявления элементов ретикулоэндотелиальной системы и изучения их состояния; метиленовый синий – для избирательной окраски отд. нейронов. Распределение в клетках флуоресцентных красителей используется для оценки жизнеспособности клеток и при проведении некоторых цитохимических исследований.

Источник

Основной метод обследования для выявления кариеса: визуальный осмотр с зеркалом

Это самый первый и основной метод, применяемый в клинической практике. Выводы о состоянии зубов пациента ранее базировались исключительно на данных визуального осмотра. Но у этого метода проведения диагностики кариеса имеются существенные недостатки: низкая недостаточная информативность, как правило, почти полная невозможность выявления фиссурного или апроксимального кариеса.

Качество визуального осмотра зависит от субъективных факторов. Обязательные условия проверки включают в себя предварительное очищение и высушивание исследуемых зубов, хорошее освещение. Это подходящий метод для диагностики поверхностного кариеса, а также среднего или глубокого — на начальной стадии заболевания визуальный осмотр не позволяет выявить дефекты. Апроксимальный (контактный) кариес иногда можно выявить по изменению окраски эмали (она темнеет, становится сероватой или меловидной), флосс застревает между зубами, а также воспален межзубный сосочек.

ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСКА

ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСКА

(лат. vitalis жизненный, живой) — прижизненная окраска животных или растительных клеток и тканей. С этой целью пользуются почти безвредными или малотоксичными красителями. Впервые витальное окрашивание произвел австрийский ученый Унгер (F. Unger, 1848), который ввел в белые лепестки гиацинта сок красных плодов Phytolacca. В гистофизиологии животных В. о. с помощью аммиачного кармина и индиго-сернокислого натрия впервые была применена русским ученым Н. А. Хржонщевским (1864, 1866) при исследовании функции почек и печени.

В. о. является одним из важных экспериментальных методов цито- и гистофизиологии. Иногда В. о. используется в клинике в качестве функциональной пробы при изучении физиологической полноценности почек (см. Хромоцистоскопия).

С помощью В. о. возможно: 1) изучение закономерностей поступления, накопления и выделения веществ, участвующих в метаболизме организма; 2) визуальное исследование некоторых физиол, процессов (секреции, экскреции); 3) маркировка определенных участков организма (органов, эмбриональных зачатков животных и растений, клеток или их органелл); 4) изучение физиол, состояния клетки в норме и при различных раздражающих и повреждающих воздействиях; 5) обнаружение в клетке определенных хим. веществ (нуклеиновых кислот, белков). Наиболее удобный объект для проведения В. о.— культуры клеток и тканей, однако В. о. успешно применяется и для кусочков органов и даже небольших животных и растений, целиком погружаемых в краситель. В. о. проводится также путем инъекции красителя в животную или растительную ткань. Распределение красителя в клетках и тканях обычно наблюдают под светооптическим микроскопом, а в тех случаях, когда для В. о. используют флюоресцирующие красители (флюорохромы),— с помощью люминесцентного микроскопа, что значительно повышает чувствительность исследования.

Для В. о. используют гл. обр. различные анилиновые красители, применяемые при гистол, методах исследования: кислотные (анионные), основные (катионные) и нейтральные (цветн. рис. 1—3). Водные растворы кислотных красителей плохо проникают в нормальную клетку. Поскольку проницаемость резко повышается при повреждающих воздействиях, эти красители (эозин) используют для выявления клеточного повреждения. Коллоидные растворы кислых красителей (трипановый синий, литиевый кармин и др.) проникают в клетку путем фагоцитоза и используются гл. обр. для изучения ретикулоэндотелиальной системы.

Основные красители, как правило, хорошо проникают в живую клетку. Их дальнейшее распределение в клетке зависит от ее состояния. В неповрежденной или мало поврежденной клетке основные красители аккумулируются в лизосомах в виде ясно выраженных цитоплазматических гранул, поэтому флюорохром акридиновый оранжевый широко используется для прижизненного выявления лизосом. При значительном повреждении клетки прекращается накопление красителей в лизосомах и появляется диффузная окраска ядра и цитоплазмы. Изменение окраски может носить обратимый характер — так наз. паранекроз (см.).

Можно увидеть споры

Окрашивание фукцином Циля позволяет увидеть споры бактерий.

Имея после окрашивания розовый цвет, они хорошо видны на фоне голубых бактерий. Этот метод также является инструментом бактериологии и имеет большое практическое значение.

Комментарии

Витальное окрашивание

Витальное окрашивание

в микроскопии — окрашивание организмов или живых препаратов их тканей для повышения контраста при наблюдении под микроскопом. Прижизненная окраска позволяет наблюдать одновременно строение и функционирование организмов, клеток и тканей. [1]

Иногда витальным окрашиванием называют также введение красителя в живой организм, с дальнейшим его умерщвлением и приготовлением микропрепарата. [2]

Ряд методов витального окрашивания микроорганизмов разработан и применяется в микробиологии.

Гранулоциты

Гранулоциты различаются по двум основным признакам структур клетки: наличие в толще цитоплазмы специфической зернистости (гранул) и сегментированного ядра. Каждый тип гранулоцитов содержит две разновидности гранул: специфические и неспецифические.

Под видом неспецифических гранул выступают особые формы лизосом – структур, которые содержат гидролитические ферментные вещества.

В зависимости от свойств специфических гранул в каждой клетке различают клетки базофилов, нейтрофилов и эозинофилов. Основное отличие нейтрофилов заключается в наименьшем размере гранул, составляющих всего 0,1-0,3 мкм. Состав этих гранул отличается содержанием фагоцитинов, лизоцима, а также щелочной фосфатазы. Основная функция нейтрофилов, как клеток человека, – защитная.

Бактерии и микроорганизмы

Литература

Полезное

Смотреть что такое «Витальное окрашивание» в других словарях:

ВИТАЛЬНОЕ ОКРАШИВАНИЕ — окрашивание живых организмов, клеток или их частей в целях изучения … Словарь ботанических терминов

Витальное окрашивание — (от лат. vitalis жизненный, живой) гистофизиологический метод окрашивания живых растительных или животных клеток специальными красителями, при котором клетка не погибает; то же, что Прижизненное окрашивание … Большая советская энциклопедия

ОКРАШИВАНИЕ ВИТАЛЬНОЕ, ОКРАШИВАНИЕ ИНТРАВИТАЛЬНОЕ — (infravital staining) процесс окрашивания живой ткани путем введения красителя в организм. Для сравнения: Окрашивание суправитальное … Толковый словарь по медицине

окрашивание витальное — прижизненное окрашивание клеток микроорганизмов (обычно анилиновыми красителями) для изучения морфологии, подвижности. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии

Окрашивание Витальное (Vital Staining), Окрашивание Интравитальное (Infravital Staining) — процесс окрашивания живой ткани путем введения красителя в организм. Для сравнения: Окрашивание суправитальное. Источник: Медицинский словарь … Медицинские термины

Прижизненное окрашивание — витальное окрашивание, метод окрашивания живых клеток специальными красителями, применяемыми в нетоксических концентрациях. Такими красителями могут быть основные, например нейтральный красный и метиленовый синий (хромофорная группа… … Большая советская энциклопедия

ПРИЖИЗНЕННОЕ ОКРАШИВАНИЕ — см. витальное окрашивание … Словарь ботанических терминов

ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСНА — ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСНА,или прижизненная окраска, явление окрашивания тканей при жизни организма путем введения в него различных красящих веществ. Определение В. окраски как окраски живых тканей не совсем правильно, так как чрезвычайно трудно в ряде… … Большая медицинская энциклопедия

Хржонщевский, Никанор Адамович — (1836 1906) рус. физиолог и гистолог. В 1864 окончил Казан. ун т. Проф. Харьков. (с 1867) и Киев. (с 1869) ун тов. Работы посвящены изучению строения и физиология, функции легких, почек, печени, кровеносных и лимфатич. сосудов, функции кожи,… … Большая биографическая энциклопедия

Наиболее типичные красители

Для получения окрашенного образца используют анилиновые красители с различным значением рН.

Основные (ударение на второе О) красители – красящим агентом является катион. Использование определенных реагентов позволяет окрашивать микробы в разные цвета:
фиолетовые – генциан-, метил- и кристаллвиолет, тионин;
синий – виктория и метиленовая синь;
зеленый – метиленовая и малахитовая зелень;
коричневый – хризоидин и везувин;
черный – индулин.
Кислые (рН меньше 7) красители – красящими свойствами обладает анион. Наиболее распространенными красителями микробов являются:
желтый – пикриновая кислота;
черный – нигрозин.
Нейтральные краски — окрашивают как катионы, так и анионы; примером является родамин В.

Витальное окрашивание Прижизненное окрашивание

Практические советы Витальное окрашивание Прижизненное окрашивание Домашняя лаборатория Занимательная микроскопия Изготовление микропрепаратов Камера Горяева Классификация и маркировка объективов микроскопов Комбинации цветных стекол для выделения спектра Методы микроскопирования Методы исследования простейших Методы и приемы биологического эксперимента Микроскопия для начинающих Микроскопические измерения Модификации контрастной окраски по Граму Необходимое оборудование Общие методы заключения препаратов Организация и оснащение гистологической лаборатории Освещение по Келлеру Подготовка предметных стекол Поляризационная микроскопия Правила работы с микроскопом Правила ведения лабораторного журнала Приобретение микроскопа Приготовление микропрепаратов членистоногих Техника приготовления гистологических препаратов Фототубус для цифровых камер Формидрон инструкция по применению

При изучении живых объектов, особенно обладающих небольшими размерами, нередко применяется окрашивание витальными красителями, т. е. такими, которые в известных концентрациях окрашивают объект, не убивая его. Различают основные и кислые витальные красители, причем при зоологических работах чаще применяются первые.

Необходимо отметить, что при обычных условиях витальные красители не окрашивают ядра живой клетки или в очень малой степени окрашивают основное вещество протоплазмы. Краски адсорбируются главным образом различными клеточными включениями. При длительном воздействии на клетки краски откладываются в протоплазме в виде гранул.

Мы не можем здесь рассматривать теорию витального окрашивания и ограничимся указанием некоторых наиболее распространенных основных красителей.

Нейтральный красный особенно часто применяется для витального окрашивания простейших, при изучении у них процессов внутриклеточного пищеварения и т. д. Применяется в очень слабых концентрациях от 0,1 до 0,001 %-ного. В более крепких концентрациях убивает клетку. Нейтральный красный является индикатором. В кислой среде он имеет ярко-красный оттенок, в щелочной — желтоватый.

Конго красный дает коллоидные растворы с малой степенью дисперсности, поэтому лишь с трудом проникает в протоплазму. Является индикатором, в кислой среде синий, в щелочной — красный. Применяется главным образом при изучении внутриклеточного пищеварения.

Метиленовый синий — один из обычных витальных красителей. Применяется, как и нейтральный красный, в очень слабых концентрациях. Иногда служит для окрашивания некоторых систем органов — нервной системы, выделительной системы (например, у Dinophilus).

Янус зеленый занимает среди прижизненных красителей особое положение. Он окрашивает избирательно митохондрии. Используются очень слабые водные растворы (0,01—0,05%-ные). Окраску объекта лучше вести, не покрывая покровным стеклом. Это связано с тем, что для окраски митохондрий необходимо наличие свободного кислорода.

Источник

Работа с фиксированными препаратами

По сложности работы методы окраски фиксированных (неживых) клеток разделяются на:

Простые методы. В этом случае используют только одну краску, как правило, красную (фуксин) или синюю (метиленовый синий). Разница между этими красителями состоит в скорости воздействия. Фуксин дает результат уже через 1-2 мин., тогда как результат работы синей краски нужно ждать 3-5 мин. Использовать раствор фуксина в карболовой кислоте (т. н. фуксин Циля) удобно еще и потому, что приготовленный препарат в течение нескольких месяцев не теряет окрашивающих свойств. Метиленовый синий краситель тоже может быть подготовлен заранее в крепком спиртовом растворе.
Сложные (дифференциальные) методы. Здесь потребуется несколько красителей (минимум два), имеющих различный цвет. Это позволит не просто увидеть бактерии, но и подробнее изучить их внутреннее строение, так как различные участки клетки могут по-разному воспринимать красители. К сложным относят методы Грама, Циля – Нильсена (для кислотоустойчивых бактерий), Бениньетти (окраска бактериальных жгутиков), Гинса (выявление капсул), дифференцирующий метод Романовского – Гимзы (окраска спор) и некоторые другие.

Дифференцирующий способ Романовского – Гимзы основан на применении специального готового порошка, на основе которого лаборатории готовят раствор красителя нужной концентрации. Преимущество этого способа в том, что цитоплазма и ядро клетки получают различную окраску, что облегчает идентификацию и изучение микроорганизмов.

Метод Нейссера используют в медицине для обнаружения зерен волютина (гранул с запасом пищи для многих прокариотических клеток) у возбудителей дифтерии. В результате окрашивания бактерия приобретает желтый цвет, а гранулы волютина – синий.

Электроодонтодиагностика (ЭОД)

Данный клинический метод применяют в стоматологии чаще всего для диагностики глубокого кариеса. Суть его заключается в следующем: на пульпу зуба воздействуют электрическим током минимального напряжения до появления небольших болевых ощущений. Для здоровой пульпы значения лежат в интервале 2-6 мкА, для затронутой кариозным процессом — не более 8 мкА. У данного метода есть и недостатки: он не выявляет начальный кариес, не позволяет определить глубину и степень распространения процесса. Детям метод ЭОД не назначают.

Люминесцентная диагностика

Метод исследования для выявления поверхностного кариеса, основанный на способности эмали под воздействием УФ-лучей изменять свой цвет. На зубы направляют пучок УФ-лучей с расстояния 20-30 см. Их твердые ткани начинают светиться. В норме дентин и эмаль излучают ярко-голубое свечение. При кариозном поражении внутренних структур или эмали интенсивность люминесценции значительно изменяется: например, на участках с меловыми пятнами заметно гасится. Этот метод диагностики кариеса зубов позволяет обнаружить изменения внутри них на самых ранних стадиях.

Зондирование

Врач использует периодонтальный или пуговичный зонд для определения состояния зубных единиц. Исследуя различные области зуба с помощью зонда, он выясняет, насколько чувствительна реакция зубных тканей.

Зондирование позволяет выявить и воспаленную пульпу — в этом случае пациент ощущает резкую боль от прикосновения зонда. При запущенной стадии заболевания или остром течении эмаль может быть рыхлой и даже откалываться от прикосновения зонда.

Трансиллюминация

Метод предназначен для выявления различных видов кариеса в начальной стадии. Основан на разнородной светопоглощающей способности зубных структур. Трансиллюминация проводится путем просвечивания изнутри рта. В лучах проходящего сквозь твердые ткани зубов света обнаруживаются скрытые кариозные полости.

Врач делает выводы о степени и разновидности заболевания, основываясь на видимых результатах. Для фиссурного кариеса характерна темная, нечеткая тень, интенсивность которой зависит от степени поражения фиссур: чем они глубже, тем тень темнее. Если кариес апроксимальный, то кариозные очаги выглядят как полусферы коричневого оттенка, отграниченные от здоровой ткани. Трансиллюминация позволяет также обнаружить минеральные отложения (зубной камень).

Метод шелковой нити

Несмотря на то что в арсенале современной стоматологии имеются высокоточные компьютерные методы диагностики, способ шелковой нити до сих пор используют врачи на начальном осмотре, в основном для выявления апроксимального кариеса. Для этого между зубами проводят флоссом пилящими движениями (раньше это была шелковая нить, откуда и название).

При наличии кариозных поражений между зубами края у них неровные, и нить начинает цепляться. Данный способ применяют после проведения чистки эмали и между зубов, не граничащих с запломбированными. Нить может задевать зубной камень или пломбу, что снижает достоверность метода.